人神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞(SH-SY5Y)
細(xì)胞介紹：
SH-SY5Y是1970年建自骨瘤轉(zhuǎn)移灶的神經(jīng)母細(xì)胞瘤SK-N-SH細(xì)胞系經(jīng)三次克隆后的亞系(SK-N-SH—SH-SY—SH-SY5—SH-SY5Y)。該細(xì)胞顯示中等水平的多巴胺-0 -羥基酶活性。SH-SY5Y細(xì)胞的飽和密度大于1X106細(xì)胞/cm2。
 
細(xì)胞特性
1)來源：腦神經(jīng)母細(xì)胞瘤，轉(zhuǎn)移部位骨髓
2)形態(tài)：上皮細(xì)胞樣
3)含量：>lxl06 個(gè)/mL
4)污染：支原體、細(xì)菌、酵母和真菌檢測為陰性
5)規(guī)格：T25瓶或者lmL凍存管包裝
 
運(yùn)輸和保存：使用含有胎牛血清的2ml凍存管發(fā)送存活細(xì)胞。收到細(xì)胞后，可在1000RPM，常溫條件下，離心5min后，于潔凈操作臺(tái)棄去上清，加入推薦使用的培養(yǎng)基后轉(zhuǎn)移至l〇cm培養(yǎng)皿或者T25培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)，傳代達(dá)細(xì)胞生長瓶中。
狀態(tài)良好時(shí)，再進(jìn)行凍存。具體操作見細(xì)胞培養(yǎng)步驟。細(xì)胞用途：僅供使用。
 
人神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞(SH-SY5Y)細(xì)胞培養(yǎng)步驟
1)培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1.準(zhǔn)備 MEM 及 F-12 培養(yǎng)基(MEM:GIBCO)，45%; F-12(F-12: GIBCO)，45%;胎牛血清，10%。
2. 培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%;二氧化碳，5%。溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3. 凍存液：90%*培養(yǎng)基，10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲(chǔ)存。
2)細(xì)胞處理：
復(fù)蘇細(xì)胞：將含有l(wèi)mL細(xì)胞懸液的凍存管在37°C水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加l-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)?br />細(xì)胞懸液加入l〇cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
 
對(duì)于貼壁細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。力口 2m丨消化液（0.25%Trypsin-0.53mMEDTA)于培養(yǎng)瓶中，置于37°C培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加l-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
將細(xì)胞懸液按1: 2到1: 5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。貼壁細(xì)胞凍存時(shí)，棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶，細(xì)胞變圓脫落后，加入約lml含血清的培養(yǎng)基后
加入凍存管中，再添加1〇%DMSO后進(jìn)行凍存。
 
人神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞(SH-SY5Y)注意事項(xiàng)：
收到細(xì)胞后，若發(fā)現(xiàn)干冰己揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細(xì)胞有污染，請(qǐng)立即與我們電聯(lián)。所有動(dòng)物細(xì)胞均視為有潛在的生物危害性，必須在二級(jí)生物安全臺(tái)內(nèi)操作，并請(qǐng)注意防護(hù)，所有廢液及接觸過此細(xì)胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。