1. 常用的保溫方式
保溫的方式除有的 ELISA 儀器附有特制的電熱塊外，一般均采用水浴。將 ELISA 試劑盒板置于水浴箱中時，ELISA 板底應貼著水面，這樣能使溫度迅速平衡。水浴保溫的優勢在于能較好地解決因受熱不均衡所致的周圍孔與中央孔結果的吸光度差異，也就是 “邊緣效應"。
2. 避免蒸發的方法
為避免蒸發，板上應加蓋，也可用塑料貼封紙或保鮮膜覆蓋板孔，此時可讓反應板漂浮在水面上。這樣既能防止水分蒸發影響反應體系的濃度，又能保證反應在相對穩定的環境中進行。若用保溫箱，ELISA 試劑盒應放在濕盒內，濕盒要選用傳熱性良好的材料如金屬等，在盒底墊濕的紗布，最后將 ELISA 板放在濕紗布上。濕盒應先放在保溫箱中預溫至規定的溫度，特別是在氣溫較低的時候更應如此，以確保反應板能夠迅速達到所需的溫度。
3. 反應板放置的注意事項
無論是水浴還是濕盒溫育，反應板均不宜疊放，以保證各板的溫度都能迅速平衡。如果反應板疊放，會導致上下層板之間的溫度擴散不均勻，影響實驗結果的準確性。室溫溫育的反應，操作時的室溫應嚴格限制在規定的范圍內，標準室溫溫度是指 20～25℃，但具體操作時可根據說明書的要求控制溫育。室溫溫育時，ELISA 試劑盒只要平置于操作臺上即可。應注意溫育的溫度和時間應按規定力求準確。為保證這一點，一個人操作時，一次不宜多于兩塊板同時測定，這樣可以更好地控制實驗條件，確保每個反應都能在準確的溫度和時間下進行。
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